Relazione laboratorio biologia

RELAZIONE LABORATORIO BIOLOGIA

DATI PERSONALI:

TITOLO: Riconoscimento dei carboidrati

SCOPO PREMESSA:Lo scopo di questa esperienza era quello,studiando dei campioni, di determinare se questi ultimi erano dei carboidrati rispettivamente polisaccaridi, disaccaridi o monosaccaridi. Nel caso in cui i carboidrati fossero risultati dei monosaccaridi avrei dovuto stabilire se erano chetosi o aldosi e se erano pentosi o esosi. I gruppi chetonico e aldeidico sono gruppi funzionali che noi troviamo legati ai carboidrati e sono cosi costituiti:

chetonico aldeidico

O

O

R-C-R R-C

H

Quindi i carboidrati aldosi sono quelli che presentano il gruppo funzionale aldeidico e quello chetosi sono quelli che presentano il gruppo chetonico.

Invece, la distinzione tra pentosi ed esosi non dipende dal gruppo funzionale, ma dal numero di atomi di carbonio; infatti, i carboidrati pentosi ne hanno cinque, come il ribosio(RNA) e deossiribosio(DNA), invece i esoosi ne hanno sei, come il glucosio e il fruttosio.

MATERIALE REAGENTARIO:provette, pipette monouso, bagno bollente(beker+acqua bollente), reattivo di Molish, ac. Solforico(H₂SO₄), reattivo allo iodio(I₂), reattivo di Benedict, Fhelling A, Fhelling B, ac. Cloridrico(HCl), reattivo di Barfoed, reattivo di Foulger, reattivo di Bial, campioni(3-13-23).

PROCEDIMENTO:Il primo saggio che dovevo eseguire sui campioni era quello di Molish, che metteva in evidenza la presenza di un carboidrato qualsiasi. La prova consisteva nell' inserire in una provetta 2 ml di campione, 4-5 gocce di reattivo di Molish e agitare per omogeneizzare il campione e il reattivo;poi inclinando la provetta, dovevo introdurre circa 1 cm di H₂SO₄ e, in caso di positività, si formava un anello rosso tra i due strati:quello acquoso e quello acido confermando la presenza dei carboidrati; più precisamente i gruppi chetonico e aldeidico.

Strato acquoso + saggio positivo

Strato acido

La prova successiva che dovevo eseguire sui campioni era il saggio allo iodio, che voleva dimostrare la presenza di un polisaccaride e consisteva nell'inserire in una provetta 1 ml di campione e 2-3 gocce di soluzione allo iodio:

+ polisaccaridi + polisaccaridi a struttura

ramificata

- no polisaccaride

Il saggio che dovevo fare, se il primo saggio era positivo e il secondo era negativo, era il saggio di Benedict o il saggio di Fhelling, che evidenziano entrambi la presenza di un monosaccaride: il primo consisteva nell'immettere 1 ml di campione, 5 ml di reattivo di Benedict e mettere nel bagno bollente per 2 minuti. In caso di positività:

+ precipitato giallo, verde, bianco e rosso

conferma i monosaccaridi riducenti

Il secondo saggio consisteva nell'inserire in una provetta 2 ml di campione, 1 ml di fhelling A, 1 ml di fhelling B e poi scaldare nel bagno bollente per alcuni minuti. In caso di saggio positivo:

+ precipitato di Cu₂O

Se i saggi precedenti, Benedict e Fhelling, erano negativi dovevo effettuare l'idrolisi acida e dopo eseguire di nuovo il saggio per il monosaccaride,Benedict o Fhelling, però, nel caso del saggio di Fhelling, dovevo raddoppiare la quantità di fhelling B.

Dopo aver eseguito questi due saggi dovevo farne uno di conferma per i saggi di Benedict e Fhelling, e, se fossero risultati positivi, avrebbero evidenziato la presenza di monosaccaridi riducenti.

Il saggio di Barfoed consisteva nel versare 2,5 ml di reattivo, 0,5 ml di campione, mettere nel bagno bollente per 3 minuti e poi far riposare la provetta per 5 minuti, ma un eccessivo riscaldamento poteva compromettere l'esito della prova diventando positivo per i disaccaridi riducenti.

+ monosaccaridi riducenti

Gli ultimi due saggi erano da eseguire solo in presenza di monosaccaridi: il primo era il saggio di Foulger, che evidenziava la presenza di carboidrati chetosi o aldosi, e consisteva nell'introdurre 2 ml di campione e 1 ml di reattivo poi ,inclinando la provetta, si doveva introdurre circa 1 cm di HCl e mettere a scaldare nel bagno bollente per 2 minuti.

+ monosaccaride - monosaccaride aldoso

chetoso

L'altro saggio era quello di Bial che consisteva nel riconoscere se il carboidrato era pentoso o esoso: come prima cosa dovevo versare 3 ml di reattivo, 1 ml di campione e poi scaldare nel bagno bollente per 1 minuto.

+ monosaccaride - monosaccaride esoso

pentoso

TABELLE GRAFICI:

CONCLUSIONI:Il primo dei tre campioni(3), come si può notare dalla tabella, è risultato positivo al saggio di Molish che evidenziava la presenza di un carboidrato qualsiasi.

A questo punto ho eseguito il saggio per evidenziare un polisaccaride: il saggio allo iodio, che come il precedente,è risultato positivo,quindi:il campione n°3 era un POLISACCARIDE.

Il successivo campione, il n°13, sottoposto al saggio per i carboidrati, ha dato un risultato dubbio e ,sapendo che se il campione era un polisaccaride l'anello rosso che si doveva formare poteva essere molto lieve, ho eseguito anche il saggio per i polisaccaridi che è risultato negativo e quindi nel campione n°13 NON c'era la presenza di un CARBOIDRATO.

L'ultimo campione,n°23, è risultato un DISACCARIDE perché dopo aver ottenuto il saggio di Molish positivo, quello allo iodio negativo e quello di Benedict negativo, e dopo aver eseguito l'idrolisi acida, ho ripetuto il saggio per i monosaccaridi,però usando Fhelling, che è risultato positivo confermando che il campione era un disaccaride.